прадукты

Бялок ORF45 віруса герпесу, асацыяванага з саркомай Капошы (KSHV), з'яўляецца спецыфічным для гамагерпесвіруса бялком непасрэднага ранняга тэгумента.Нашы папярэднія даследаванні паказалі яго вырашальную ролю як на ранніх, так і на позніх стадыях інфекцыі KSHV.У гэтым даследаванні мы даследавалі інтэрактом ORF45 з дапамогай панэлі моноклональных антыцелаў.У дадатак да ідэнтыфікаваных раней пазаклеткавай рэгуляванай кіназы (ERK) і p90 рыбасомнай S6 кіназы (RSK) бялкоў, мы выявілі некалькі іншых сумесна ачышчаных бялкоў, у тым ліку вядомыя з ~38 кДа і ~130 кДа.Мас-спектраметрыя паказала, што бялок 38 кДа з'яўляецца вірусным ORF33, а бялок 130 кДа - клеткавым USP7 (убиквитин-спецыфічная пратэаза 7).Мы супаставілі ORF33-звязвае дамен з высокакансерватыўнымі карбаксільна-канцавымі 19 амінакіслотамі (аа) ORF45 і USP7-звязвае дамен з паведамленым кансенсусным матывам у цэнтральнай вобласці ORF45.Выкарыстоўваючы імунафлюарэсцэнтнае афарбоўванне, мы назіралі сумесную лакалізацыю ORF45 з ORF33 або USP7 як пры трансфекцыі іёнамі стану, так і ў клетках, інфіцыраваных KSHV.Больш за тое, мы заўважылі ORF45-залежную рэлакалізацыю часткі ORF33/USP7 з ядра ў цытаплазму.Мы выявілі, што ORF45 выклікаў павелічэнне назапашвання бялку ORF33, якое было адменена, калі альбо ORF33-, альбо USP7-звязвае дамен у ORF45 быў выдалены.Акрамя таго, выдаленне кансерватыўнага карбаксільнага канца ORF45 у геноме KSHV рэзка знізіла ўзровень бялку ORF33 у інфіцыраваных KSHV клетках і адмяніла вытворчасць нашчадкаў вирионов.У сукупнасці нашы вынікі не толькі выяўляюць новыя кампаненты інтэрактома ORF45, але таксама дэманструюць, што ўзаемадзеянне паміж гэтымі вавёркамі мае вырашальнае значэнне для літычнай рэплікацыі KSHV. Вірус герпесу, звязаны з саркомай Капошы (KSHV), з'яўляецца ўзбуджальнікам некалькіх відаў раку чалавека.KSHV ORF45 - гэта шматфункцыянальны бялок, неабходны для літычнай рэплікацыі KSHV, але дакладныя механізмы, з дапамогай якіх ORF45 выконвае свае важныя функцыі, незразумелыя.Нашы папярэднія даследаванні паказалі, што ўвесь пратэін ORF45 у клетках існуе ў комплексах з высокай малекулярнай масай.Таму мы імкнуліся ахарактарызаваць інтэрактом ORF45, каб даць зразумець яго ролю падчас літычнай рэплікацыі.Выкарыстоўваючы панэль моноклональных антыцелаў, мы абследавалі интерактом ORF45 ў клетках, заражаных KSHV.Мы вызначылі двух новых партнёраў па звязванні ORF45: вірусны бялок ORF33 і клетачную убиквитин-спецыфічную пратэазу 7 (USP7).Далей мы дэманструем, што ўзаемадзеянне паміж ORF45 і ORF33 мае вырашальнае значэнне для эфектыўнай вытворчасці вірусных часціц KSHV, мяркуючы, што мэтанакіраванае ўмяшанне ў гэта ўзаемадзеянне можа прадстаўляць новую стратэгію інгібіравання літычнай рэплікацыі KSHV.