прадукты

Дыферэнцыяцыя фібрабластаў арбіты ў спелыя адыпацыты і наступнае назапашванне тлушчавай тканіны было паказана пры прагрэсаванні арбітапатыі Грейвса (ГО).Аўтафагія ўдзельнічае ў адыпагенезе, але мала вядома пра ролю аўтафагіі ў ініцыяцыі і прагрэсаванні ГА.Мэта гэтага даследавання - вывучыць ролю аўтафагіі ў патагенезе ГА. Былі прааналізаваны эксплантаты арбітальнай тлушчавай/злучальнай тканіны пацыентаў з ГА і нармальных суб'ектаў, а таксама ізаляваныя фібрабласты арбіты.Адыпагенез індукавалі з дапамогай дыферэнцыруючай асяроддзя з перакісам вадароду або без яе, а аўтафагію маніпулявалі з выкарыстаннем бафіламіцыну А1 і кароткай шпілечнай РНК (shRNA), арыентаванай на Atg5.Аўтафагасомы ідэнтыфікавалі з дапамогай электроннай мікраскапіі.Экспрэсію генаў, звязаных з аўтафагіяй, і фактараў транскрыпцыі, звязаных з адыпагенезам, аналізавалі з дапамогай палімеразнай ланцуговай рэакцыі зваротнай транскрыпцыі ў рэальным часе і/або Вестэрн-блот аналізу.Назапашванне кропель ліпідаў даследавалі з дапамогай афарбоўвання Oil Red O. Аўтафагічныя вакуолі былі больш распаўсюджаныя ў клетках GO, чым у клетках без GO (p<0,05).Экспрэсія генаў, звязаных з аўтафагіяй, была значна вышэй у тканінах і клетках GO, чым у іх аналагах без GO адпаведна.Інтэрлейкін-1β павялічыў LC3-II, p62 і Atg7 бялок у клетках GO.Назапашванне аутофагосом было паказана на 4-ы дзень адыпагенезу і паменшылася да 10-га дня разам з адукацыяй ліпідных кропель.Экспрэсія бялкоў LC3 і p62 павялічвалася на працягу 48 гадзін пасля дыферэнцыявання і паступова зніжалася з 4 па 10 дзень. Лячэнне бафіламіцынам A1 і накдаўн Atg5 з дапамогай shRNA інгібіравалі назапашванне ліпідных кропель і падаўлялі экспрэсію адыпагенных маркераў. Аўтафагія была павялічана ў тканінах і клетках GO у параўнанні з тканіны і клеткі, якія не ўваходзяць у GO, што сведчыць аб тым, што аўтафагія гуляе ролю ў патагенезе GO.Маніпуляцыя аўтафагіяй можа быць тэрапеўтычнай мішэнню для GO.