прадукты

Моногалактопиранозиды флуарэсцеіну і метылавага эфіру флуарэсцеіну: сінтэз, ферментатыўны гідроліз біятніляванай β-галактазідазай і вызначэнне каэфіцыента трансляцыйнай дыфузіі

Флуарэсцеінавыя монагліказіды (d-галактапіранозід (FMG) і d-глюкапіраназід) і іх метылавы эфір (MFMG) былі атрыманы з ацетабромаглюкозы/галактозы і метылавага эфіру флуоресцеіна з добрым выхадам.Былі праведзены эксперыменты ферментатыўнага гідролізу (з выкарыстаннем біятыніляванай β-галактазідазы) вытворных галакта і разлічаны кінетычныя параметры.Пры гідролізе назіраецца павелічэнне інтэнсіўнасці флуарэсцэнцыі ў 15-20 разоў.Лінейнае павышэнне флуарэсцэнцыі было адзначана пры кароткім прамежку часу і нізкай канцэнтрацыі субстрата, што робіць гэтыя злучэнні карыснымі і адчувальнымі зондамі для галактазідаз.Велічыня значэння канстанты Міхаэліса-Ментэна (Km) для MFMG вышэй, чым для FMG, што сведчыць аб магчымай канфармацыйнай змене флюарагеннага субстрата.Значэнне Km для біятыніляванага β-Gal з FMG ніжэй, чым для натыўнага фермента.Гэта назіранне сведчыць аб больш высокім сродстве біятыніляванага фермента да субстрата ў параўнанні з натыўным ферментам.З дапамогай флуарэсцэнтнай карэляцыйнай спектраскапіі былі вымераны каэфіцыенты трансляцыйнай дыфузіі як для флюарэгенных субстратаў, так і для абодвух прадуктаў.Каэфіцыенты трансляцыйнай дыфузіі для флюарагенных субстратаў і прадуктаў ферментатыўнага гідролізу былі падобныя ў дыяпазоне 3,5–4,5 × 10-10 м2 с-1.Такім чынам, узмацненне або запаволенне ферментатыўнай кінетыкі з-за розніцы ў паступальнай рухомасці субстрата і прадукту не так відавочна.