прадукты

Падобна іншым вірусам з пазітыўнай ланцугом РНК, томбусвірусы рэплікуюцца мембранна-звязаным комплексам віруснай рэпліказы (VRC).VRC складаецца з кадзіраванай вірусам р92 РНК-залежнай РНК-палімеразы (RdRp), віруснага РНК-шаперона р33 і некалькіх кааптаваных бялкоў гаспадара.Каб стаць функцыянальным RdRp пасля яго трансляцыі, бялок рэплікацыі p92 павінен быць уключаны ў VRC з наступнай яго актывацыяй.Раней мы паказалі ў аналізе на аснове бясклетачнага дражджавога экстракта, што для актывацыі RdRp віруса памідораў (TBSV) неабходны растваральны(-ыя) фактар(-ы).У гэтым артыкуле мы ідэнтыфікуем клеткавы бялок цеплавога шоку 70 (Hsp70) як кааптаваны фактар ​​гаспадара, неабходны для актывацыі скарочанага на N-канцы рэкамбінантнага RdRp TBSV.Акрамя таго, блакіроўка функцыі Hsp70 на аснове малых малекул інгібіруе сінтэз РНК тамбусвірусам RdRp in vitro.Акрамя таго, мы паказваем, што нейтральныя фасфаліпіды, а менавіта фасфатыдылетаналамін (ФЭ) і фасфатыдылхалін (ФК), узмацняюць актывацыю RdRp in vitro.Наадварот, фасфатыдылгліцэрын (PG) паказвае моцнае і дамінантнае інгібіруе дзеянне на актывацыю RdRp in vitro.Мы таксама дэманструем, што PE і PC стымулююць узаемадзеянне RdRp-віруснай плюс-ланцуговай РНК [(+)РНК], у той час як PG інгібіруе звязванне віруснай РНК з RdRp.Грунтуючыся на стымулюючай і інгібіруючай ролях розных фасфаліпідаў у актывацыі RdRp віруса томбуса, мы мяркуем, што ліпідны склад мэтавых субклеткавых мембран можа быць выкарыстаны томбусвірусамі для рэгулявання зборкі новых VRC падчас інфекцыі. Кадзіраваная вірусам РНК-залежная РНК-палімераза (RdRp), які адказвае за сінтэз нашчадкаў віруснай РНК у інфіцыраваных клетках некалькіх вірусаў з станоўчай ланцугом РНК, першапачаткова неактыўны.Гэтая стратэгія, хутчэй за ўсё, дазваляе пазбегнуць сінтэзу віруснай РНК у цытазолі, які хутка прывядзе да індукцыі клеткавых антывірусных рэакцый, выкліканых РНК.Падчас зборкі звязанага з мембранай комплексу рэпліказы вірусны RdRp актывуецца ў выніку не зусім зразумелага працэсу, які робіць RdRp здольным да сінтэзу РНК.Выкарыстоўваючы TBSV RdRp, мы паказваем, што кааптаваны клеткавы шаперон Hsp70 і нейтральныя фасфаліпіды спрыяюць актывацыі RdRp in vitro.Наадварот, фасфатыдылгліцэрын (PG) аказвае дамінуючы інгібіруючы эфект на актывацыю RdRp in vitro і ўзаемадзеянне RdRp-віруснай РНК, што сведчыць аб тым, што мембранны мікрадамен, які атачае RdRp, моцна ўплывае на яго здольнасць да сінтэзу РНК.Такім чынам, актывацыя віруснага RdRp, верагодна, залежыць ад некалькіх кампанентаў гаспадара ў заражаных клетках.