прадукты

Для канкрэтнага колькаснага вызначэння некалькіх метабалітаў 5-фторурацыла (5-FU) і двух эндагенных монофосфатных нуклеатыдаў мы распрацавалі арыгінальны метад, заснаваны на вадкаснай храматаграфіі-тандэмнай мас-спектраметрыі (LC-MS/MS).Гэты аналіз дазволіў вызначыць: (i) унутрыклеткавую вытворчасць 5-фтор-2'-дэзаксіурыдын-5'-монафасфату (5-FdUMP) з 5-FU або 5-фтор-2'-дэзаксіурыдыну (5-FdUrd) , (ii) уплыў канцэнтрацыі 5-FdUMP на суадносіны ўнутрыклеткавага 2'-дезоксиуридин-5'-монофосфата (dUMP)/тимидин-5'-монофосфата (TMP), і (iii) ступень сакрэцыі 5-FdUMP і 5-ФУ з клетак чалавека, культывуемых транспарцёрамі ABC.У нашых эксперыментальных умовах клеткі інкубавалі з 5-FU або 5-FUrd.Затым клеткавыя вавёркі асаджвалі метанолам.Гэтая працэдура забяспечвала высокую аднаўленне экстракцыі.Акрамя таго, для вымярэння сакрэцыі 5-FU і 5-FdUMP з клетак мы правялі колькаснае вызначэнне гэтых малекул у культуральной асяроддзі.Носьбіты альбо ўводзілі непасрэдна (5-FU), альбо праходзілі цвёрдафазную экстракцыю з выкарыстаннем экстракцыйнага картрыджа Oasis Wax (5-FdUMP).Падзел аналітаў праводзілі на калонцы dC18 Atlantis 3,5 мкм (100 мм × 2,1 мм унутраным унутранымнутры) у ізакратычным рэжыме з выкарыстаннем у якасці рухомай фазы буфера формиата амонія/метанолу/вады (5/5/90, аб/аб).Час выканання не перавышае 6,2 мін.Аналізаваныя рэчывы іянізавалі ў інтэрфейсе электрараспылення ў рэжыме адмоўных іёнаў.Мы пацвердзілі метад у дыяпазоне 2,5-150 нг мл -1 у залежнасці ад злучэнняў.Варыябельнасць ўнутры і паміж аналізамі была ніжэй за 10% на працягу сямі дзён.Усе злучэнні былі стабільнымі ў клетках або ў культуральным асяроддзі, калі ўзоры захоўваліся пры тэмпературы -20 °C не менш за два тыдні і пасля трох цыклаў замарожвання-адтавання.Ніякага эфекту матрыцы ў абодвух асяроддзях не назіралася.