прадукты

Мембранная тапалогія дамена канала каліцыну E1 была вывучана метадам флуарэсцэнтнага рэзананснага пераносу энергіі (FRET).FRET уключае генетычна закадзіраваную флуоресцентную амінакіслату (кумарын) у якасці донара і выбарачна пазначаны астатак цыстэіну, звязаны з DABMI (4-(дыметыламіна)фенілазафеніл-4'-малеімід) у якасці акцэптара FRET.Флуарэсцэнтны рэшту кумарыну быў уключаны ў бялок з дапамогай артаганальнай пары тРНК/амінаацыл-тРНК-сінтэтазы, што дазваляла селектыўнае ўключэнне ў любы сайт у дамене каліцынавага канала.Кожны варыянт утрымліваў мутацыю стоп (TAG) для ўключэння кумарыну і мутацыю цыстэіну (TGT) для далучэння DABMI.Шэсць міжспіральных адлегласцей у межах спіраляў 1-6 былі вызначаны з дапамогай аналізу FRET як для растваральнага, так і для звязанага з мембранай стану.Дадзеныя FRET паказалі вялікія змены ў міжспіральных адлегласцях паміж спіралямі 3-6 пры асацыяцыі з мембранай, што дае новае ўяўленне аб звязанай з мембранай структуры дамена канала.Увогуле, міжспіральныя эфектыўнасці кумарын-DABMI FRET зніжаліся пры звязванні з мембранай, абапіраючыся на парасонавую мадэль каліцынавага канала.Арыенціровачная мадэль для закрытага стану дамена канала была распрацавана на аснове бягучых і раней апублікаваных дадзеных FRET.Мадэль мяркуе кругавое размяшчэнне спіраляў 1-7 па гадзіннікавай стрэлцы з пазаклеткавай боку і межфазную асацыяцыю спіраляў 1, 6, 7 і 10 вакол цэнтральнай трансмембраннай шпількі, утворанай спіралямі 8 і 9.