прадукты

Спосаб, якім эфекты адначасовых мутацый аб'ядноўваюцца для змены ферментатыўнай актыўнасці, нялёгка прадказальны, таму што гэтыя эфекты не заўсёды складаюцца лінейна.Такім чынам, характарыстыка эфектаў адначасовых мутацый амінакіслотных рэшткаў, якія звязваюць субстрат, можа ўнесці істотны ўклад у разуменне субстратнай спецыфічнасці ферментаў.У бэта-гліказідазе Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) абодва астаткі Q39 і E451 ўзаемадзейнічаюць з субстратам, і гэта важна для вызначэння субстратнай спецыфічнасці.Падвойныя мутанты Sfbetagly (A451E39, S451E39 і S451N39) былі атрыманы метадам сайт-накіраванага мутагенезу, экспрэсаваны ў бактэрыях і ачышчаны з дапамогай аффинной храматаграфіі.Гэтыя ферменты былі ахарактарызаваны з выкарыстаннем п-нітрафеніл бэта-галактозіда і п-нітрафеніл бэта-фукозіду ў якасці субстратаў.Каэфіцыент k cat/Km для адзіночных і двайных мутантаў Sfbetagly, якія змяшчаюць сайт-накіраваныя мутацыі ў пазіцыях Q39 і E451, быў выкарыстаны, каб прадэманстраваць, што ўплыў на свабодную энергію ESdouble dagger (комплекс фермент-пераходны стан) падвойных мутацый (Gdouble) daggerxy) не з'яўляецца сумай эфектаў у выніку адзіночных мутацый (Gdouble daggerx і Gdouble daggery).Гэтая розніца ў Gdouble dagger паказвае на тое, што эфекты адзінкавых мутацый часткова перакрываюцца.Такім чынам, гэты агульны эфект залічваецца толькі адзін раз у Gdouble daggerxy.Крышталаграфічныя дадзеныя аб бэта-гликозидазах выяўляюць наяўнасць бидентатной вадароднай сувязі з удзелам рэшткаў Q39 і E451 і той жа гідраксільнай групы субстрата.Такім чынам, як тэрмадынамічныя, так і крышталаграфічныя дадзеныя сведчаць аб тым, што рэшткі Q39 і E451 аказваюць узаемны ўплыў на іх адпаведнае ўзаемадзеянне з падкладкай.