прадукты

Фасфараляванне бялку рэгулюе розныя функцыі клетак і гуляе ключавую ролю ў раннім развіцці раслін.Каб дапоўніць і пашырыць папярэднія даследаванні фасфаралявання бялку ў праростках Arabidopsis, мы выкарысталі альтэрнатыўны падыход, які спалучае экстракцыю бялку ў недэнатурацыйных умовах з імабілізаванай іёнамі металаў афіннай храматаграфіяй (IMAC) з узбагачэннем інтактных фасфапратэінаў у экстрактах, збедненых Rubisco, з наступнай ідэнтыфікацыяй. з дапамогай двухмернага гель-электрафарэзу (2-DE) і вадкаснай храматаграфіі-тандэмнай мас-спектраметрыі (LC-MS/MS).Расшчапленне трыпсінамі ў гелі і аналіз выбраных гелевых плям выявілі 144 фасфарыляваныя пептыды і рэшткі, з якіх толькі 18 фасфапептыдаў і 8 фасфазітаў былі знойдзены ў базах дадзеных сайтаў фасфаралявання PhosPhAt 4.0 і P3DB Arabidopsis thaliana.Больш за палову з 82 ідэнтыфікаваных фасфапратэінаў удзельнічалі ў вугляводным абмене, фотасінтэзе/дыханні або механізмах адказу на акісляльны стрэс.Узбагачэнне інтактных фасфапратэінаў перад 2-DE і ВХ-МС/МС, відаць, паляпшае выяўленне фасфарыляваных астаткаў трэаніну і тыразіну ў параўнанні з метадамі, якія выкарыстоўваюць узбагачэнне на ўзроўні пептыдаў, што сведчыць аб тым, што абодва падыходы ў некаторай ступені дапаўняюць адзін аднаго з пункту гледжання ахопу сайтаў фасфаралявання.Параўнанне вынікаў для маладых саджанцаў з вынікамі, атрыманымі раней для спелых лісця арабідопсісу, вызначыла пяць бялкоў, якія па-рознаму фасфаралююцца ў гэтых тканінах, дэманструючы патэнцыял гэтага метаду для даследавання дынамікі фасфаралявання бялку падчас развіцця раслін.